無菌室的要求 
1．工作室應(yīng)矮小、平整，面積只需4米2左右，高2.2―2.3米，內(nèi)部裝修應(yīng)平整、光滑，無凹凸不平或棱角等，四壁及屋頂應(yīng)用不透水之材質(zhì)，便于擦洗及殺菌 
2．室內(nèi)采光面積大，從室外應(yīng)能看到室內(nèi)情況。 
3．為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設(shè)緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間，其面積可小于無菌室。 
4．無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及供消毒空氣用紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以1米為宜 ，其電源開關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。 
5．無菌室與緩沖間進(jìn)出口應(yīng)設(shè)拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門應(yīng)錯開，以免空氣對流造成污染。 
6．無菌室的使用與管理 
（1） 無菌室應(yīng)保持清潔整齊，室內(nèi)僅存放必須的檢驗用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。不要放與檢測無關(guān)的物品 
（2） 室內(nèi)檢驗用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。 
（3） 每2―3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，zui后紫外燈殺菌半小時 
（4） 定期檢查室內(nèi)空氣無菌狀況，細(xì)菌數(shù)應(yīng)控制在10個以下，發(fā)現(xiàn)不符合要求時，應(yīng)立即*消毒滅菌。無菌室無菌程度的測定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養(yǎng)基平板各3個（平板直徑均9厘米），置無菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時，然后倒置進(jìn)行培養(yǎng)，測細(xì)菌總數(shù)應(yīng)置37℃溫箱培養(yǎng)48小時；測霉菌數(shù)則應(yīng)置27℃溫箱培養(yǎng)5天。細(xì)菌霉菌總數(shù)均不得超過10個為 。 
（5） 無菌室殺菌前，應(yīng)將所有物品置于操作之部位（待檢物例外），然后打開紫外燈殺菌30分鐘，時間一到，關(guān)閉紫外燈待用 
（6） 進(jìn)入無菌室前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。 
（7） 操作應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)定進(jìn)行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。 
器材及場所的滅菌消毒 
微生物檢驗用器材及場所必須進(jìn)行滅菌或消毒處理，不同的對象采用不同的處理方法 
1． 高壓蒸汽滅菌: 工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內(nèi)，一般采用121℃滅菌半小時,當(dāng)然不同的培養(yǎng)基有不同的要求,應(yīng)分別處理 
2． 火焰滅菌： 接種針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌 
3． 高溫干燥滅菌： 各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃滅菌2小時 
4． 一 般消毒: 無菌室內(nèi)的凳、工作臺、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進(jìn)行滅菌，必須用其他方法進(jìn)行消毒處理，采用2%石炭酸或來蘇兒水溶液擦拭消毒，工作人員的手也用此法進(jìn)行消毒 
5． 空氣的消毒： 開啟紫外燈照射30―60分鐘 即可。

操作要領(lǐng) 
準(zhǔn)備工作 
1． 先進(jìn)行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30―60分鐘 
2． 檢驗用的有關(guān)器材， 搬入無菌室前必須分別進(jìn)會滅菌消毒 
3． 操作人員必須將手清洗消毒，穿戴好無菌工作衣、帽和鞋，才能進(jìn)入無菌室 
4． 進(jìn)入無菌室后再一次消毒手部，然后才進(jìn)行檢驗操作
操作過程注意事項 
1． 動作要輕，不能太快，以免攪動空氣增加污染；玻璃器皿也應(yīng)輕取輕放，以免破損污染環(huán)境 
2． 操作應(yīng)在近火焰區(qū)進(jìn)行。 
3． 接種環(huán)、接種針等金屬器材使用前后均需灼燒，灼燒時先通過內(nèi)焰，使殘物烘干后再灼燒滅菌 
4． 使用吸管時，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必須用洗耳球操作。 
5． 觀察平板時不好開蓋，如欲沾取菌落檢查時，必需靠近火焰區(qū)操作，平皿蓋也不能 大開，而是上下蓋適當(dāng)開縫。 
6． 進(jìn)行可疑致病菌涂片染色時，應(yīng)使用夾子夾持玻片，切勿用手直接拿玻片，以免造成污染，用過的玻片也應(yīng)置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗滌。 
7． 工作結(jié)束，收拾好工作臺上的樣品及器材，zui后用消毒液擦拭工作臺。